Concordancia entre las técnicas de IFD, PCR y ELISA para determinar la frecuencia de Bordetella parapertussis y Bordetella pertussis en un brote de tos ferina en el departamento de Antioquia (Colombia) en 2013 / Correlation among the DIF, PCR and ELISA techniques for determining the frequency of Bordetella parapertussis and Bordetella pertussis in an outbreak of whoopingcough in the department of Antioquia, Colombia, 2013

Objetivo: Obtener la concordancia de técnicas diagnósticas y confirmar el diagnóstico de los casos probables de tos ferina captados por inmunofluorescencia directa (IFD) durante un brote en 2013 en el departamento de Antioquia. Materiales y métodos: Se analizaron los datos demográficos, clínicos, epidemiológicos y de resultados de laboratorio de casos probables de tos ferina confirmados por IFD en un pico de tos ferina en 2013 en el departamento de Antioquia. Las muestras de aspirado nasofaríngeo y suero fueron recolectadas y recibidas entre los periodos epidemiológicos IV - VII de 2013. Todos los pacientes confirmados por IFD fueron confirmados por PCR o ELISA. El análisis de concordancia se realizó por índice kappa. Resultados: De las 180 muestras procesadas en el LSP de Antioquia, 134 (74%) fueron positivas por la técnica de IFD, de las cuales se confirmaron por PCR 109 muestras con 24 (22%) positivas para B. parapertussis , 3 (2,8%) para B. pertussis , 17 (15,6%) para Bordetella spp. y 18 (16,5%) con infección mixta por B. pertussis y B. parapertussis . De 81 casos que se confirmaron por ELISA, 31 (38,3%) fueron positivos. En el municipio de La Estrella la edad media de los casos confirmados fue de 6,6 años y la mediana de 3 años (rango: 2-4 años). Con respecto a los casos del municipio de Medellín, la edad media fue de 28,7 años y la mediana de 25 años (rango: 12-42 años). En su mayoría, en los síntomas no hubo diferencias significativas, excepto para la tos paroxística entre los casos confirmados de B. parapertussis y B. pertussis (p = <0,04) del municipio de La Estrella. De acuerdo con el índice kappa, los resultados mostraron una fuerza de concordancia pobre y sin grado de acuerdo con los resultados de las pruebas de PCR y ELISA comparados con IFD, índice kappa: (IFD/PCR: K = 0,0944) y (IFD/ELISA: K = - 0,4533). Conclusiones: Durante este análisis, en el 2013 la población de Antioquia fue afectada por la circulación de B. parapertussis y B. pertussis en población adolescente y adulta en Medellín y en la población de 2-4 años en La Estrella. Actualmente, la PCR y la ELISA son las técnicas adecuadas para el diagnóstico de tos ferina. La IFD por su subjetividad y baja concordancia se encuentra en desuso.

Objective: To determine the correlation between diagnostic techniques and to confirm the diagnosis of probable cases of whooping cough captured by direct immunofluorescence (DIF) during an outbreak in 2013 in the department of Antioquia. Materials and methods: We analysed the demographic, clinical, and epidemiological data and the laboratory results of probable cases of whooping cough confirmed by DIF at a peak of whooping cough in 2013 in the department of Antioquia. The nasopharyngeal aspirate and serum samples were collected and received between the epidemiological periods IV - VII of 2013. All patients confirmed by DIF were confirmed by polymerase chain reaction (PCR) and/or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The analysis of agreement was performed using the kappa index. Results: Of the 180 samples processed in the public health laboratory of Antioquia, 134 (74%) were positive using the DIF technique of which 109 samples were confirmed by PCR, with 24 (22%)samples positive for B. parapertussis , 3 (2.8%) for B. pertussis , 17 (15.6%) for Bordetella spp. and18 (16.5%) for mixed infection by B. pertussis and B. parapertussis . Of the 81 cases confirmed by ELISA, 31 (38.3%) were positive. In the municipality of La Estrella, the mean age of the confirmed cases was 6.6 years, and the median was 3 years (range, 2-4 years). For the municipality of Medellin, the mean age was 28.7 years, and the median was 25 years (range, 12-42 years). For most of the symptoms, there were no significant differences, except for paroxysmal cough among the confirmed cases of B. parapertussis and B. pertussis ( p = <.04) in the municipality of La Estrella. According to the kappa index, the results showed poor correlation strength and no agreement with the results of the PCR and ELISA tests compared with DIF, kappa index: (DIF/PCR: K = 0.0944) and (DIF/ELISA: K = - 0.4533). Conclusions: During this analysis in 2013, Antioquia was affected by the circulation of B. parapertussis and B. pertussis in the adolescent and adult population in Medellin and the 2-4 year-old population in La Estrella. Currently, PCR and ELISA are the recommended techniques for diagnosing whooping cough. Due to its subjectivity and low correlation, DIF is in disuse.

Complete genome sequence of a clinical Bordetella pertussis isolate from Brazil

There has been a resurgence in the number of pertussis cases in Brazil and around the world. Here, the genome of a clinical Bordetella pertussis strain (Bz181) that was recently isolated in Brazil is reported. Analysis of the virulence-associated genes defining the pre- and post-vaccination lineages revealed the presence of the prn2-ptxS1A-fim3B-ptxP3 allelic profile in Bz181, which is characteristic of the current pandemic lineage. A putative metallo-β-lactamase gene presenting all of the conserved zinc-binding motifs that characterise the catalytic site was identified, in addition to a multidrug efflux pump of the RND family that could confer resistance to erythromycin, which is the antibiotic of choice for treating pertussis disease.

Tos convulsa grave y su correlación anatomopatológica / Whooping cough and severe pathologic correlation

La tos convulsa es una infección bacteriana de las vías respiratorias, producida por Bordetella pertussis. En la era prevacunación fue una enfermedad endémica, con picos epidémicos cada 2 a 5 años. Luego de la vacunación generalizada, la tasa de infección disminuyó 150 veces. En Uruguay en el año 2011 hubo un aumento en los casos de tos convulsa, con mayor cantidad de ingresos a unidades de cuidados intensivos y de muerte por tos convulsa. Objetivo: describir los casos clínicos de 3 pacientes con tos convulsa grave que fallecieron en UCIN en el período de octubre-noviembre de 2011 y los hallazgos en la anatomía patológica. Se describen tres casos que se presentaron como tos coqueluchoide con fallo respiratorio que requirió asistencia ventilatoria mecánica. En los tres se confirmó el diagnóstico de infección por Bordetella pertussis. Los tres presentaron hiperleucositosis severa que requirió exanguinotransfusión y desarrollaron hipertensión pulmonar (HTP) severa con shock cardiogénico y fallo renal anúrico. En la anatomía patológica de los 3 pacientes se observó necrosis miocárdica extensa, necrosis tubular aguda y necrosis neuronal con edema cerebral. Conclusión: la tos convulsa ha resurgido en los últimos años, siendo de mayor gravedad en menores de 6 meses. Se destaca lo estereotipado de la presentación y evolución con hipoxemia refractaria e HTP que llevan al colapso cardiocirculatorio...

Coqueluche: actualización de una enfermedad de siempre / Pertussis: update of an ancient disease

La infección por Bordetella pertussis continúa siendo un problema de salud pública mundial que en algunos casos representa una enfermedad de riesgo vital, en especial en lactantes menores de 3 meses.

Vacina acelular contra pertússis para adolescentes / Acellular pertussis vaccine for adolescents

OBJETIVOS: A utilização da vacina de células inteiras contra coqueluche levou a uma redução significativa na incidência da enfermidade na criança. Essa mudança no perfil epidemiológico resultou em aumento no número de casos em adolescentes e adultos, conseqüente à perda da imunidade conferida pela doença ou por vacina após cerca de 10 anos, e em lactentes não imunizados ou incompletamente imunizados. O licenciamento da vacina tríplice bacteriana contra difteria, tétano e coqueluche acelular, com formulação específica para maiores de 10 anos de idade (dTpa), apontou para a possibilidade do controle da coqueluche na população das faixas etárias mais acometidas nos últimos anos. FONTE DE DADOS: As informações foram coletadas na base de dados MEDLINE. A pesquisa foi limitada ao período compreendido entre janeiro de 1995 a janeiro de 2006. SíNTESE DOS DADOS: Estão licenciadas em alguns países duas vacinas dTpa para a faixa etária maior de 10 anos de idade, uma delas contendo cinco componentes imunogênicos da Bordetella pertussis: toxina pertússis, hemaglutinina filamentosa, fimbrias 2 e 3 e pertactina, e a outra contendo três componentes: pertactina, hemaglutinina filamentosa e toxina pertússis inativada, sendo esta a única apresentação licenciada até o momento no Brasil. Embora a composição das duas vacinas seja diferente, os estudos mostram que a imunogenicidade e a eficácia são semelhantes. Entretanto, alguns autores enfatizam que existem dificuldades para a realização de uma avaliação mais precisa da resposta imunológica à vacina e sua duração. Vários países já recomendam de rotina o uso da vacina dTpa para adolescentes. O Canadá ampliou a população alvo até 54 anos de idade. A orientação é de que esse grupo receba uma dose da vacina como reforço do esquema básico de imunização. Isso é fundamentado em resultados de estudos que mostram que a duração da imunidade induzida pela vacina é em torno de 6 a 12 anos. As avaliações sobre o impacto econômico do uso rotineiro da vacina em adolescentes evidenciam uma relação custo-benefício positiva. Os resultados do impacto epidemiológico dependem da qualidade do diagnóstico para que os dados reflitam a realidade da doença. CONCLUSÕES: Embora existam algumas questões a serem esclarecidas, a literatura disponível sinaliza a possibilidade para a solução do .ressurgimento. da coqueluche com o uso da vacina dTpa.

Quimioprofilaxis en coqueluche: ¿sacar agua a canastos? / Pertussis chemoprophylaxis: a sterile effort?

La quimioprofilaxis (QP) en coqueluche debe orientarse a proteger personas con riesgo de presentar complicaciones graves o fallecer: neonatos y lactantes bajo un año, senescentes, pacientes con afecciones cardiacas y pulmonares con insuficiencia funcional, y mujeres en tercer trimestre de embarazo (para proteger al neonato). La evidencia disponible permite recomendar una QP selectiva en los contactos ocurridos en el hogar, hasta 21 días de aparecer el caso primario, y antes de presentarse un caso secundario, recomendación que puede hacerse extensible a personas con alto riesgo que co-habitan con un caso índice en el hospital, guarderías infantiles y hogares de ancianos. La transmisibilidad de B. pertussis podría alcanzar una distancia mayor de 1,5 metros desde la cara del paciente, concepto importante para diseñar la QP en el medio hospitalario. Sólo existen argumentos sólidos para emplear macrólidos y azálidas; siete días es un plazo suficiente para erradicar B. pertussis con eritromicina o claritromicina, 5 días para azitromicina.

Coqueluche grave: puesta al día / Severe pertussis: update

La Coqueluche es una enfermedad infecto-contagiosa vigente como problema de salud pública, pese a la instauración de programas de inmunización hace más de 50 años en Chile. La presentación clínica ha cambiado, siendo los menores de un año el principal grupo de riesgo, con una inusitada tasa de incidencia mayor a 200 veces la de otros grupos etáreos. En este grupo además se concentrala mayor morbilidad y mortalidad asociada, presentándose en ocasiones como un cuadro grave altamente letal asociado a hiperleucocitosis, hipertensión pulmonar y shock cardiogénico. En esta revisión se describen los factores de riesgo y características de la evolución grave de coqueluche, se discute su terapia convencional así como la evidencia actual y utilidad de tratamientos nuevos para el manejo de esta patología. Se presenta la experiencia en nuestro centro con esta patología y la propuesta de un algoritmo terapéutico.

Coqueluche en adultos y adolescentes / Pertussis in adults and adolescents

La coqueluche en adultos y adolescentes ha sido invocada como uno de los factores que condicionan la persistencia de la enfermedad en comunidades con altas coberturas de vacunación. Mejores recursos de laboratorio, incluyendo serología y reacción de polimerasa en cadena, han confirmado que un número significativo de las infecciones se presentan en estos grupos de edad. Sus síntomas pueden ser tan típicos como en niños o atípicos, siendo un hecho constante la tos persistente sobre 7 a 14 días. Se revisan los criterios de laboratorio para certificar el diagnóstico, las recomendaciones actuales de tratamiento y quimioprofilaxis en contactos y se discute la factibilidad de aplicar vacuna acelular en adolescentes y adultos, su potencial impacto e indicaciones.

En coqueluche: ¿es posible? / In pertussis: is it possible?

Existen esquemas alternativos a los recomendados por la Academia Americana de Pediatría para el tratamiento antimicrobiano de la coqueluche. Estudios controlados apoyan la posibilidad de reducir el plazo de tratamiento a 7 días empleando eritromicina. Desde cuidarse en especial la dosficación de eritromicina (para etilsuccinato debe ser de 50 a 60 mg/kg/ día y administrarse siempre inmediatamente después de las comidas). El empleo de nuevos macrólidos requiere mayor base experimental para establecer dosis diaria, duración y eficacia bacteriológica. Es conveniente implementar el cultivo en centros centros centinelas para vigilar la susceptibilidad in vitro de bordetella pertussis y ratificar la eficacia bacteriológica de los esquemas abreviados de terapia específica. Los pasos abreviados de tratamiento de la infección establecida por bordetella pertussis parecen ser extrapolables a los esquemas recomendados para la profilaxis en los contactos

Selección de variantes Bvg- de Bordetella pertussis / Selection of Bordetella pertussis Bvg- variants

Las cepas virulentas (Bvg+) de Bordetella pertussis expresan numerosos factores de virulencia. Estos factores están regulados por el locus bvg en respuesta a estímulos ambientales, a través del proceso reversible de modulación antigénica. A su vez, mutaciones en el locus bvg originan variantes avirulentas (Bvg-) que no expresan factores de virulencia en ninguna condición de cultivo. En este trabajo hemos seleccionado variantes espontáneas Bvg- de B. pertussis Tohama I y 10536, potencialmente útiles para el estudio de marcadores de virulencia, utilizando como medios selectivos Stainer-Scholte agarizado suplementado con 1 o/o de Casamino-acids (SSA-CAS) y Jones-Kendrick con 0,20 microgramos/ml de eritromicina (JK-Ery). Paralelamente hemos estudiado la eficiencia de recuperación de células de B. pertussis Tohama 1, 10536 y 40103 (cepas Bvg+) y de la cepa Bvg- 347 (control del fenotipo avirulento) en SSA-CAS y en Steiner-Scholte agarizado (SSA), y analizado el fenotipo de las células recuperadas a partir de ellos. Para la caracterización fenotípica se utilizaron los siguientes marcadores de fase virulenta: producción de hemólisis, producción de hemaglutininas y perfiles de proteínas de fracciones enriquecidas en membrana externa. Las tres cepas Bvg+ ensayadas mostraron diferente comportamiento en estos medios. B. pertussis Tohama 1 y 10646 no crecieron en SSA, mientras que la eficiencia de recuperación en el medio SSA-CAS fue inferior al 0,001 o/o, obteniéndose variantes Bvg- estables de la cepa Tohama 1, en cambio la cepa 10536 sufrió el fenómeno de modulación, ya que recuperó el fenotipo virulento al ser subcultivada en Bordel-Gengou. El medio JK-Ery permitió seleccionar variantes Bvg- estables de B. pertussis Tohama 1 y 10536. B. pertussis 40103 mostró alta eficiencia de recuperación en SSA y SSA-CAS y retuvo el fenotipo virulento en todos los medios ensayados. Por otra parte, B. pertussis 347, a pesar de ser avirulenta, presento una eficiencia de recuperación pobre en SSA y un crecimiento escaso en JK-Ery, corroborando que no todas las cepas Bv- adquieren la capacidad de crecer en medios que resultan inhibitorios para muchas cepas virulentas

Evaluación del cultivo bacteriano e inmunofluorescencia para el diagnóstico de tos ferina / Evaluation of bacterial culture and immunofluorescence for whooping cough diagnosis

A pesar de la amplia cobertura alcanzada por la vacuna DPT a nivel nacional, cada 4 años se producen brotes de tos ferina que afectan principalmente al menor de un año. Por ser ésta una enfermedad infectocontagiosa de alta transmisibilidad y con una presentación clínica generalmente atípica respecto al cuadro clínico tradicionalmente descrito, resulta fundamental el apoyo de un diagnóstico bacteriológico que oriente las medidas terapéuticas a tomar con los casos y contactos. A partir de 1992 el Instituto de Salud Pública de Chile introdujo la técnica de cultivo bacteriano para la pesquisa de Bordetella pertussis. Dicha técnica se realiza en forma paralela a la inmunofluorescencia directa. En este trabajo se evalúa el rendimiento comparativo de ambos procedimientos en muestras de secreción nasofaríngea obtenidas por aspiración, en 423 niños de las Regiones Metropolitana y Quinta con diagnóstico de síndrome coqueluchoideo, durante el año 1992. Cincuenta y ocho muestras (13.7 por ciento) dieron resultados positivos con uno u otro método, 23 fueron con ambas técnicas, 20 sólo con inmunofluorescencia y 15 sólo en el cultivo. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en el rendimiento de ambas técnicas; sin embargo, la incorporación del cultivo bacteriano permitió identificar 15 infecciones por B. pertussis adicionales, que para los efectos de este estudio representaban 25,8 por ciento de los casos diagnosticados, lo que justifica el uso simultáneo de ambas

A Bordetella pertussis acellular vaccine candidate: antigenic characterization and antibody induction

A single-step chromatography on Matrex-Gel Blue A has been employed to obtain soluble extracts containing some of the most important antigens of Bordetella pertussis, pertussis toxin (PT), filamentous hemagglutinin (FHA), pertactin (69-kDa outer membrane protein), fimbriae (FIM2 and FIM3) and adenylate cyclase (AC). Two supernatants, P19 (48.8 mg PT, 6.8 mg FHA, 17.3 mg AC, 13 mg FIM2 and 4.9 mg FIM33 per liter) and P21 (0.1 mg PT, 0.07 mg FHA, 0.46 mg FIM2 and 0.94 mg FIM3 per liter), resulting from bacteria grown in Stainer-Scholte medium, were submitted to chromatography. Fractions with the antigens were obtained after stepwise elution with 60 mM sodium phosphate buffer, pH 6.0; 50 mM Tris-HC1, pH 7.4; 50 mM Tris-HC1, pH 7.4/0.75 M MgCl2; 50mM Tris-HCl, pH 7.4/4 M MgCl2 and 4 M urea. Preparations from P19 (containing 4.05 µg PT, 8.14 µg FHA, 6.3 µg AC, 3.37 µg 69-kDA, 9.54 µg FIM2 and 2.23 µg FIM3) and P21 (with 0.175 µg PT, 0.28 µg PT, 0.28 µg FHA, 0.002 µg69-kDa, 0.005 µg FIM2 and 0.122 µg FIM3) were detoxified with glutaraldehyde and tested as an acellular pertussis vaccine. These products were non-toxic for mice and induced high levels of antibodies against purified pertussis antigens, as judged by ELISA

Bordetella pertussis: a propos d'un cas de coqueluche chez un nouveau-ne

Bordetella pertussis, the causative agent of whooping cough, was isolated by culture of nasopharyngeal secretions of 22 days new-born who was hospitalized for paroxysms cough and apnea. The specimen was directly plated on freshly made selective media [Bordet-Gengou medium supplemented with 10% fresh horse blood and penicillin]. Bordetella pertussis isolate was susceptible to amoxcillin, gentamicin, tobramycin, amikacin, tetracyclin, chloramphenicol and of intermediate sensitivity to erythromycin. This isolate should be weakly virulent. The evolution was favourable after 6 days treatment with amoxycillin and gentamicin. In spite of the vaccination, whooping cough remains a not rare disease. The diagnostic may be confirmed by the laboratory, but the successful isolation of Bordetella pertussis depends on the quality of specimen and media

Avances en pertusis / Advances on pertussis

Se analiza en general la patogenia, epidemiología y aspectos clínicos de pertusis, enfermedad respiratoria aguda causada por la Bordetella Pertussis, son analizadas ofreciendo una visión sobre su evolución y las estrategias posibles para obtener su control. Se hace énfasis en la evolución de la inmunización desde vacunas de célula completa (de primera generacion) a las que se atribuyen reacciones adversas postvaccinales, a las de segunda generacion constituídas con factores solubles del mismo organismo, para llegar finalmente a las de tercera generación producidas mediante técnicas de ADN recombinante y mutagénesis sitio-específicas, que parecerían seguras y excelentes inmunógenos en ensayos en voluntarios, quedando aún por evaluar sus resultados en experimentos de campo

Biología molecular de Bordetella pertussis / Molecular biology of Bordetella pertussis

Bordetella pertusis produce una infección localizada del tracto respiratorio; en los tejidos humanos y en los modelos animales de laboratorio tiene una predilección por el epitelio ciliado. Hay un cierto número de antígenos y toxinas los cuales pueden ser importantes en la patogénesis: aglutinógenos, hemaglutinina filmentosa, factor promotor de la linfocitosis (FPL), adenilatociclasa, toxina termolabil, lipopolisacárido y la citotoxina traqueal. La B. pertussis puede producir también una reacción febril causada por la endotoxina, la atenuación de la respuesta inflamatoria del huésped posiblemente por efecto de la adenilatociclasa, la linfocitosis, leucocitosis, los efectos sobre la homeostasis de la glucosa y la neurotoxicidad producidos por el FPL; sin embargo, no existe un modelo razonable para estudiar la inmunidad local de la tosferina. Los avances recientes en el laboratorio, podrían tener una repercusión sobre la producción de la vacuna y su empleo clínico